Elektroforeza: co to jest, do czego służy i jak się to robi

Zawartość

• Po co to jest
• Jak to się robi
• Rodzaje elektroforezy
• 1. Elektroforeza hemoglobiny
• 2. Elektroforeza białek

Elektroforeza jest techniką laboratoryjną wykonywaną w celu rozdzielenia cząsteczek według ich wielkości i ładunku elektrycznego, tak aby można było postawić diagnozę chorób, zweryfikować ekspresję białek lub zidentyfikować mikroorganizmy.

Elektroforeza to prosta i tania procedura, stosowana w rutynowych pracach laboratoryjnych oraz w projektach badawczych. W zależności od celu elektroforezy może być konieczne na przykład przeprowadzenie innych testów i badań w celu ustalenia diagnozy.

Po co to jest

Elektroforeza może być wykonywana do różnych celów, zarówno w projektach badawczych, jak i diagnostycznych, ponieważ jest to prosta i tania technika.Zatem elektroforezę można przeprowadzić w celu:

• Identyfikuj wirusy, grzyby, bakterie i pasożyty, przy czym ta aplikacja jest częściej stosowana w projektach badawczych;
• Test na ojcostwo;
• Sprawdź ekspresję białek;
• Zidentyfikuj mutacje, przydatne np. W diagnostyce białaczki;
• Analiza rodzajów krążącej hemoglobiny, przydatna w diagnostyce anemii sierpowatej;
• Oceń ilość białek obecnych we krwi.

W zależności od celu elektroforezy może być konieczne wykonanie innych badań uzupełniających, aby lekarz mógł uzupełnić diagnozę.

Jak to się robi

Do przeprowadzenia elektroforezy wymagany jest żel, którym może być poliakrylamid lub agaroza w zależności od przeznaczenia, bufor do elektroforezy i kadzi, marker masy cząsteczkowej i barwnik fluorescencyjny, a także sprzęt do oświetlania UV lub LED, znany również jako transiluminator.

Po przygotowaniu żelu należy położyć określony przedmiot tak, aby w żelu, popularnie zwanym grzebieniem, wykonać zagłębienia i pozwolić żelowi zastygnąć. Gdy żel będzie gotowy, wystarczy nałożyć substancje na dołki. W tym celu w jednej ze studzienek należy umieścić marker masy cząsteczkowej, kontrolę pozytywną, czyli substancję, o której wiadomo, co to jest, kontrolę negatywną, która gwarantuje prawidłowość reakcji i próbki do analizy. Wszystkie próbki należy zmieszać z barwnikiem fluorescencyjnym, ponieważ w ten sposób można zwizualizować prążki na transiluminatorze.

Żel z próbkami należy umieścić w kadzi do elektroforezy, w której znajduje się określony roztwór buforowy, a następnie włączyć urządzenie tak, aby pojawił się prąd elektryczny, a co za tym idzie, różnica potencjałów, co jest ważne dla separacji cząstek zgodnie z ich obciążenie i rozmiar. Czas przebiegu elektroforetycznego różni się w zależności od celu zabiegu i może trwać do 1 godziny.

Po określonym czasie możliwe jest obejrzenie wyniku przebiegu elektroforetycznego przez transiluminator. Po umieszczeniu żelu w świetle UV lub LED można zwizualizować wzór prążkowania: im większa cząsteczka, tym mniejsza jest jej migracja, zbliżając się do studni, natomiast im lżejsza cząsteczka, tym większy potencjał migracyjny.

Aby reakcja została zweryfikowana, prążki kontroli pozytywnej muszą być zwizualizowane, aw kontroli negatywnej nic nie może być wizualizowane, ponieważ w przeciwnym razie jest to wskazanie, że nastąpiło zanieczyszczenie, a cały proces należy powtórzyć.

Rodzaje elektroforezy

Elektroforezę można przeprowadzić w różnych celach i zgodnie z jej przeznaczeniem można zastosować kilka rodzajów żelu, z których najpowszechniejszy jest poliakrylamid i agaroza.

Elektroforeza do identyfikacji mikroorganizmów jest częściej wykonywana w laboratoriach badawczych, jednak w celach diagnostycznych elektroforeza może służyć do identyfikacji chorób hematologicznych i chorób, które ewoluują wraz ze wzrostem ilości białek, będących głównymi rodzajami elektroforezy:

1. Elektroforeza hemoglobiny

Elektroforeza hemoglobiny jest techniką laboratoryjną wykonywaną w celu identyfikacji różnych typów hemoglobiny krążącej we krwi, umożliwiając identyfikację obecności chorób związanych z syntezą hemoglobiny. Rodzaj hemoglobiny identyfikuje się za pomocą elektroforezy przy określonym pH, najlepiej między 8,0 a 9,0, z wzorem prążków, które można porównać do wzoru normalnego, co pozwala na identyfikację nieprawidłowych hemoglobin.

Do czego służy: Elektroforeza hemoglobiny jest wykonywana w celu zbadania i zdiagnozowania chorób związanych z syntezą hemoglobiny, takich jak anemia sierpowata i hemoglobina C, a ponadto jest przydatna w różnicowaniu talasemii. Dowiedz się, jak interpretować elektroforezę hemoglobiny.

2. Elektroforeza białek

Elektroforeza białek to badanie zlecone przez lekarza w celu oceny ilości białek krążących we krwi, a tym samym identyfikacji chorób. Badanie to wykonuje się z próbki krwi, która jest odwirowywana w celu uzyskania osocza, części krwi składającej się między innymi z białek.

Po elektroforezie można zwizualizować wzór prążków, a następnie wykres, na którym wskazana jest ilość każdej frakcji białek, co ma podstawowe znaczenie dla diagnozy.

Do czego służy: Elektroforeza białek pozwala lekarzowi na zbadanie występowania szpiczaka mnogiego, odwodnienia, marskości wątroby, zapalenia, choroby wątroby, zapalenia trzustki, tocznia i nadciśnienia tętniczego według wzoru pasmowego i wykresu przedstawionego w raporcie z badania.

Dowiedz się, jak to się robi i jak zrozumieć wynik elektroforezy białek.